83日目。

今日の予定

・実験（seqenceing　transfection　免疫沈降）

-------------------------------------------------------
先日から行っていたconstructionで、GFP-Aが完成したのでいろいろな条件でtransfectionして免疫染色を行い、AとBとCの局在を観察してみた。

用いたconstruct
A：GFP-A
B：HA-B
C：DsRed-C
　　　　　　　　　　　
Aのみを発現させた場合→Aはcytosolに局在
AとCを発現させた場合→Aはmainはendosomeにsubでcytosolに局在
AとBとCを発現させた場合→Aはほぼ完全にendosomeに局在
AとBを発現させた場合→mainはcytosolにsubでendosomeに局在
（Bの局在：cytosolとnucleus）
（Cの局在：endosome）

いちおうモデルとしては
A⇔B(dimer)B⇔C
みたいなのを考えてるのだけど、Bの局在がなあ・・・。

とりあえずCおよびAにおけるBとのbinding siteを確定させてその部位を欠落させたconstructを用いてdominant negativeを行ってみるしかないか。。。


まあ、とりあえず、悲観すべき結果ではなかったのでそれはそれでよしとしよう。すくなくともこのネタで修論は書けそうな気がしてきたし。