337日目。
2003年7月18日今日の予定
・実験（westernのつづき， 免疫染色， transfection）
・グループセミナー（M1論文紹介）
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ぼくの実験、特に肝であるIP-Westernがうまくいかないという事態が4月くらいから続いている（それまではうまくいっていたのに）というのは、ぼくのなかで相当なストレスになっていたのですが、今までの実験ではリスク（自分の疲労とかやる気の問題）を負っていなかったと思い、大掛りな条件検討をおこないました。
細胞を溶かすときに用いるlysis bufferを条件を変えて16種類作製し、同じようにtransfectionしたサンプルを16種類用意し一気にlysis→IP→Western。
その結果、150mM NaCl+10mM Tris(pH7.4)+0.2%NP40+1mM EDTAのlysis bufferと、150mM NaCl+10mM Tris(pH7.4)+10mM CHAPS+1mM EDTAおよび150mM KCl+10mM Tris(pH7.4)+10mM CHAPS+1mM EDTAの3条件で結合を確認することができました。
（これらの条件ではIPするときにCaCl2を10mM加えている。）
これで、もう一度再現取れたら、長らく悩んでいたのも解消ぽいです。。。
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今日のツールドフランスは個人タイムトライアルの日です。個人総合を争う選手たちにとってはかなり大きな意味を持つステージなので非常に楽しみです。。。
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高校の部活のOB会が8月16日にあるらしい。今まで卒業してから6年あって1回しか行ったことはなかったけれど、今年は特に予定も無いので行ってみてもいいかもしれない。
・・・と思ったら同じ日が多摩川の花火大会だったぽい。。。
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今号のフナコシニュースのトップに載っているPIERCEの"ProFound Protein Interaction Mapping Kit"って夢のキットのような気がするのですが、皆さんつかってらっしゃるひとはいますかねえ。いらっしゃった方はご一報ください。
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・実験（westernのつづき， 免疫染色， transfection）
・グループセミナー（M1論文紹介）
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ぼくの実験、特に肝であるIP-Westernがうまくいかないという事態が4月くらいから続いている（それまではうまくいっていたのに）というのは、ぼくのなかで相当なストレスになっていたのですが、今までの実験ではリスク（自分の疲労とかやる気の問題）を負っていなかったと思い、大掛りな条件検討をおこないました。
細胞を溶かすときに用いるlysis bufferを条件を変えて16種類作製し、同じようにtransfectionしたサンプルを16種類用意し一気にlysis→IP→Western。
その結果、150mM NaCl+10mM Tris(pH7.4)+0.2%NP40+1mM EDTAのlysis bufferと、150mM NaCl+10mM Tris(pH7.4)+10mM CHAPS+1mM EDTAおよび150mM KCl+10mM Tris(pH7.4)+10mM CHAPS+1mM EDTAの3条件で結合を確認することができました。
（これらの条件ではIPするときにCaCl2を10mM加えている。）
これで、もう一度再現取れたら、長らく悩んでいたのも解消ぽいです。。。
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今日のツールドフランスは個人タイムトライアルの日です。個人総合を争う選手たちにとってはかなり大きな意味を持つステージなので非常に楽しみです。。。
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高校の部活のOB会が8月16日にあるらしい。今まで卒業してから6年あって1回しか行ったことはなかったけれど、今年は特に予定も無いので行ってみてもいいかもしれない。
・・・と思ったら同じ日が多摩川の花火大会だったぽい。。。
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今号のフナコシニュースのトップに載っているPIERCEの"ProFound Protein Interaction Mapping Kit"って夢のキットのような気がするのですが、皆さんつかってらっしゃるひとはいますかねえ。いらっしゃった方はご一報ください。
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